HIV感染的檢查方法有哪些？

HIV感染的檢查方法有哪些？艾滋病的檢測應注意窗口期的問題，從艾滋病病毒進入人體到血液中產生足夠量的、能用檢測方法查出艾滋病病毒抗體之間的這段時期，稱為窗口期。在窗口期雖測不到艾滋病病毒抗體，但體內已有艾滋病病毒，因此處于窗口期的感染者同樣具有傳染性。

實驗室檢查

樣品采集

艾滋病檢測最常用的樣本是血液，有時唾液或尿液也可作測試標本。

常用標本的采集方法如下：

1、血清樣品采集：用注射器抽出3-5ml靜脈血，室溫下自然放置1-2小時，待血清和血塊收縮后再用3000rpm離心15分鐘，吸出血清備用。

2、標本采集時應注意個人防護，防止職業暴露的發生。

樣本保存及運輸

1、保存和運送：血清標本應保存于4℃以下，如需長期保存，需置低溫（-30℃至-80℃）。其運送過程也應保持低溫狀態。

2、樣本的保存和運送應符合生物安全的要求。

樣本檢測

基層艾滋病檢測主要是血清抗體檢測。

1、初篩實驗的常用檢測方法

（1）酶聯免疫吸附試驗

（2）明膠顆粒凝集試驗（PA）

2、確認實驗的常用檢測方法

免疫印跡試驗

3、其他檢測方法：PCR

血常規

常有紅細胞，血紅蛋白降低，呈輕度正色素、正細胞性貧血。白細胞常降至4.0×109/L以下。分類中性粒細胞增加，有核左移現象。少數表現為粒細胞減少。淋巴細胞明顯減少，多<1.0×109/L 。有漿細胞樣淋巴細胞和含空泡的單核細胞出現。血小板一般無變化，一旦有變化，血小板可明顯減少。

免疫學變化

以細胞免疫系統變化為主，其特征如下。

（1）淋巴細胞亞群檢查：CD4T細胞減少，CD4/CD8比例下降，正常人CD4/CD8之比為1.75～2.1，而獲得性免疫缺陷綜合征患者常<1.0。

（2）T細胞功能下降：遲發型變態反應性皮試陰性。體外非特異性有絲分裂原刺激時，淋巴細胞轉化降低。T細胞的細胞毒作用降低。T細胞產生白細胞介素-2和干擾素γ減少。

（3）B細胞功能失調：有不同程度的免疫球蛋白及免疫復合物升高。出現自身抗體，如產生RF、抗核抗體和抗淋巴細胞抗體等。

（4）自然殺傷細胞活性下降。

β2 -微球蛋白和新蝶呤（neopterin）

用放射免疫法（RIA）測定血清β2微球蛋白和新蝶呤。它們是被激活的巨噬細胞的產物，其血清水平的升高意味著免疫激活，具有與CD4T細胞絕對計數、淋巴細胞百分率、CD4/CD8細胞比例下降同樣的臨床意義，即預示病情進展至獲得性免疫缺陷綜合征。

淋巴結活檢

在獲得性免疫缺陷綜合征的高發地區及高危人群中，對腹股溝以外部位的淋巴結腫大，特別是持續性頸部淋巴結腫大的人普遍進行淋巴結活檢是重要的措施，可見到淋巴結的反應性病變和腫瘤性病變等非特異的、但具有一定診斷價值的病理表現。有的獲得性免疫缺陷綜合征患者，表淺淋巴結消失，不易做活檢。

其他

小便檢查常有蛋白尿。血中肌酸酐和尿素氮可升高。

病原學檢查

PCR可用來追蹤HIV的自然感染史。可在其它血清學和病毒學標志出現前檢測病毒序列，這樣可判定無癥狀而且血清陰性患者潛在的HIV的傳播性；可用來監測長潛伏期（4～7年）病人，以及在抗病毒治療期間病毒的水平；也可用于HIV-1血清陽性母親的嬰兒的HIV檢測。在嬰兒出生后最初的6～9個月期間，他們的血液中存在母體的抗體，因此用PCR可判定嬰兒是否真正被HIV感染。

血清抗體陽性病人HIV序列的檢測

有人從AIDS或ARC病人的外周血單核細胞培養物，精液細胞和精液上清制備DNA。然后用PCR法和逆轉錄酶測定法分別檢測HIV-1。PCR擴增產物與32P標記的探針退火之后用BstNI消化。再進行聚丙烯酰胺凝膠電泳和自顯影。結果表明，在逆轉錄酶陰性的28個細胞系中有9個以及用逆轉錄酶法不能確定的9個細胞系中有2個為陽性。這說明過去許多細胞培養物認為是陰性者，實際上用更敏感的PCR測定時則為陽性。

從血清陽性的HIV感染者的外周血單核細胞中可檢測出前病毒序列。通過共培養分離出病毒的血清陽性的同性戀男人血液制備的DNA，用PCR可100%檢出病毒序列；用血清陰性共培養陰性同性戀者的標本，經PCR擴增檢出病毒序列者為64%，血清陰性正常人標本PCR檢測也為陰性，表明未出現假陽性結果。由于HIV-1基因組的廣泛的異源性，為提高檢測的陽性率可采用多種引物（如LTR，gag和env基因的引物）。利用PCR法從313份已證實為抗體陽性的標本中檢測出310份HIV陽性（99%）。

血清抗體陰性病人的HIV序列的檢測

由于在感染HIV后到出現免疫反應之前有一段滯后期，這個血清學陰性的滯后期通常長達6周至6個月，而且無抗體產生期可能更長些。在此期間受感染者往往檢測不到抗體，因此，血清陰性的人也可能已感染HIV.PCR法在高危人群中檢測到HIV-1比由血清學轉陽確診的時間可以提高6個月。對少數初次共培養呈陰性的人，甚至可在血清轉陽之前24～39個月就能確診為HIV-1感染。對血清學試驗結果不能確定者，也可通過PCR作進一步分析和確診。

新生兒HIV序列的檢測

HIV感染的母親其嬰兒由于母體抗體的存在，用抗體檢測法通常為陽性。但實際上只有20%～60%的嬰兒受到HIV感染。因此，對這些嬰兒進行HIV感染的早期診斷是十分重要的。現已證明30～50%的這些新生兒可在母親的子宮里，在分娩和引產或通過產后哺乳時從其母體感染HIV。新生兒血清陽性者并不能說明是HIV感染。因為母體HIV抗體可持續大約15個月之久。在一般情況下，嬰兒并不表現出HIV感染的任何癥狀。病毒細胞培養法對嬰兒并不是一種可靠實用的方法；HIV特異IgM抗體的檢測在母體抗體存在下也是不可能的；在過量血清抗體存在下檢出血清中的HIV抗原也是十分困難的。另外，嬰幼兒被HIV感染后病情發展較快。早期診斷，對及時采取治療措施，延緩阻止病情發展極為重要。目前所使用的抗病毒藥毒性大，因而不能用于HIV抗體陽性而未感染的嬰幼兒。但當用PCR檢測出HIV-DNA序列后，即可進行抗病毒治療以及加強免疫機能和營養的治療。在一項研究中，14名血清陽性母親的新生兒用PCR檢測其中6個為陽性；在出生后12～15個月內血清陰性的10個兒童中有5個為PCR陽性。從血清陽性母親出生1個月的新生兒中，收集的外周血單核細胞經PCR檢測，7個為陽性的嬰兒，其中5個在檢測后10個月得AIDS;而PCR陰性的9個嬰兒，在16個月的追蹤檢查期間身體狀況良好。這些研究表明，PCR技術對被HIV感染母親的新生兒和血清陰性兒童進行早期的直接的HIV-1檢測是十分重要的。

PCR技術檢測HIV-DNA序列對AIDS和ARC的確診起著重要作用。但也有人認為 對已知HIV抗體、抗原或培養陽性的病人不必再做PCR。最合適的PCR檢測對象是那些疑有HIV感染但又缺乏確切的血清學依據的人群，如上述的HIV陽性母親所生的嬰兒，陽性患者的性伴侶，靜脈吸毒者和可疑的血清反應者。PCR技術還可用來檢測血液制品及疫苗中有無HIV。

HIV-1的病原學檢查

①HIV-1血清抗體的檢測：包括抗-gp120及抗-P24，大多數HIV-1感染者在3個月內血清抗體陽轉。因而，測定血清抗體是目前確定有無HIV感染的最簡便、快速而有效的方法。常用方法有酶聯免疫吸附試驗（ELISA），間接免疫熒光測定（IFA），放射免疫試驗（RIA）等。一般多用ELISA法作初查，其靈敏性為99.5%。但由于它是用HIV-1作為抗原進行檢測，與淋巴細胞抗原有交叉抗體，可有假陽性出現。故對初查陽性者，再用硝酸纖維膜免疫印跡試驗（Westen blot，WB）確認。

硝酸纖維膜雜交試驗特異性強，假陽性率極低。其診斷標準是：如ELISA連續兩次陽性，且WB檢測出現p24，gp41，gp120或gp160條帶中任何兩條條帶陽性者，則可確認為HIV感染。如沒有兩條條帶陽性者，則只能診為“未定型”（indeterminate pattern）。這時可用聚合酶鏈反應（PCR）檢測其特異的病毒核酸，或繼續密切觀察，反復作上述檢測，以明確診斷。

②檢測病毒抗原：由于抗體出現晚于抗原，因而不能早期診斷。如果在抗HIV-1陽轉之前的窗口期篩選獻血員，就會出現假陰性，后果是非常嚴重的。因此，篩選獻血員最好加測病毒抗原。通常檢測P24，其靈敏性及特異性均較高。既有助于早期診斷，也可用于獻血員篩選、藥物療效考核等。

③檢測病毒核酸：在抗HIV-1陽轉之前的窗口期，還可用反轉錄聚合酶鏈反應（RT-PCR）技術檢測HIV RNA。此法靈敏度更高，檢測周期短，也有助于早期發現、獻血員篩選、藥物療效考核等。但操作必須十分小心，防止污染，以避免假陽性。

④病毒分離和培養：從患者的淋巴細胞、血液、精液及其他體液中均可分離出病毒，陽性率較高，反復多次分離陽性率可達100%。分離的病毒可用CD4T細胞培養。但方法復雜，成本較高，一般只用于實驗室研究。分離或培養到HIV均為確診的依據。

HIV-2的病原學檢查

血清學檢查發現約80%的HIV- 1和HIV-2感染之間存在交叉反應。故用于檢測HIV-1感染的ELISA和RIBA法難以確定HIV-2感染。特別是發生了HIV-l和HIV-2雙重感染時，使診斷更為困難。不過，HIV-2特異的ELISA及WB法藥盒現已有商品出售。在HIV-2流行區，可在檢測HIV-1的基礎上，先用HIV-2特異的ELISA藥盒區別HIV-1和HIV-2感染，再用HIV-2特異的WB法作確認試驗。在非流行區，當HIV-1試驗陽性或弱陽性，而WB法不明確或陰性，或臨床懷疑獲得性免疫缺陷綜合征，而HIV-1試驗弱陽性、WB法陰性時，也要用HIV-2特異的ELISA藥盒檢測，以明確診斷。

近來為了節省時間和經費，大部分試劑盒廠家和血庫采用HIV-1和HIV-2抗體聯合測定。聯合測定的ELISA模式與HIV-1抗體測定相同，不同的是在包被固相載體時用HIV-1和HIV-2二種抗原的混合物替代單一的HIV-1抗原。

輔助檢查

獲得性免疫缺陷綜合征極易并發機會性感染和惡性腫瘤，并常死于這些并發癥。因此，對本病患者進行胸部及胃腸道X線檢查，及早作出機會性感染和惡性腫瘤的診斷，對及時治療和延長患者的生命是十分重要的。

胸部X線檢查

常見的機會性感染有卡氏肺孢菌肺炎，惡性腫瘤有卡波齊（Kaposi）肉瘤。

（1）卡氏肺孢菌肺炎

典型X線表現是：初起時兩肺先出現混合性肺泡及間質炎性改變，以肺門周圍散在性網狀結節樣間質浸潤為主，從肺門向外擴展。隨后在數日內病變進入肺泡，發展成肺泡性實變，在肺野內形成均勻斑片狀實變影，其間夾雜有廣泛性或局灶性肺氣腫或小段肺不張，以肺外圍最明顯。呈粗糙的或細顆粒狀的“毛玻璃樣”表現，病變可僅限于一個肺葉，也可彌漫分布。有時片狀陰影可融合成大片狀均勻致密的浸潤影，呈向心性分布，與肺水腫的X線特征很相似。也可在“毛玻璃樣”背景上出現結節狀病灶。在肺周圍還可有條狀陰影，有些則僅表現為粗結節陰影。但這些X線表現沒有特異性，確診需要反復經纖維支氣管鏡檢找到病原。不典型X線表現有：肺大葉性實變，可一葉也可多葉實變；肺空腔形成或胸腔積液；肺泡內滲出物亦可鈣化等。應注意與肺結核或肺部真菌感染相鑒別。胸內淋巴結增大，主要是位于縱隔、右氣管旁及兩側肺門的淋巴結增大。有的病例甚至無呼吸系統癥狀出現，而僅于X線片上顯示胸內淋巴結增大，以后才被證實為獲得性免疫缺陷綜合征。此種X線表現強烈提示肺內有嚴重感染或腫瘤存在，需作纖維支氣管鏡或淋巴結活檢。

（2）卡波齊肉瘤

最常見的X線異常是肺間質浸潤，約占肺卡波齊肉瘤患者的80%。此外，可見肺野內直徑<1cm的、境界不清楚的多發性小結節影及明顯的條狀陰影。常伴有縱隔及肺門淋巴結增大，也可有胸腔積液。當X線表現不明顯時，CT檢查有助診斷。

消化道X線檢查

胃腸道機會性感染主要的病原體是巨細胞病毒，惡性腫瘤仍以卡波齊肉瘤為常見。

（1）巨細胞病毒感染

巨細胞病毒可侵犯胃腸道的任何部位，但以結腸最為常見，個別病例可累及整個胃腸道。巨細胞病毒性食管炎或胃炎在X線片上表現為黏膜皺襞腫脹，小的充盈缺損及淺表潰瘍或糜爛等。巨細胞病毒性結腸炎病變有散在性及局灶性兩種。散在性者病變侵犯整個胃腸道，但程度不一。鋇灌腸示結腸袋形消失，腸腔輕度狹窄，腸黏膜可有肉芽腫、糜爛及淺表潰瘍等。節段性者以侵犯盲腸及末端回腸為主。X線造影顯示盲腸痙攣，黏膜皺襞不規則增厚及表淺的鵝口瘡樣潰瘍，但應與潰瘍性結腸炎和克羅恩病的X線表現相鑒別。上述X線表現均為非特異性的，應結合臨床資料進行分析。必要時應配合內鏡加活檢以確診。

（2）卡波齊肉瘤

卡波齊肉瘤可發生在胃腸道的任何部位。食管卡波齊肉瘤在X線片上顯示食管中段呈多發性腔內息肉樣病變。胃卡波齊肉瘤表現為胃遠端散在性、多發性無蒂的黏膜下缺損，輪廓光滑，直徑幾毫米至幾厘米。少數病變中央有鋇劑積聚，顯示“牛眼征”，在充氣擴張的胃內還可見不規則增厚的黏膜皺襞。十二指腸卡波齊肉瘤為球部內黏膜下結節或輕度斑片狀隆起。小腸卡波齊肉瘤為多發性結節伴中央潰瘍。結腸卡波齊肉瘤以直腸最明顯，表現為整個結腸黏膜下散在的結節狀充盈缺損，直徑幾毫米至幾厘米不等。較晚期患者結節融合和環形浸潤腸壁，使直腸狹窄和僵直。