甲真菌病的診斷方法是什么？

甲真菌病是臨床常見病，目前已有報道采用組織病理學方法對其真菌學檢 查進行補充[1～3]提高了診斷率。但在實際工作中，組織病理 學方法較為繁瑣，為尋找一種更便捷有效的診斷方法，我們進行了甲真菌病的掃描電鏡診斷研究。

一、病例和方法

（一）病例：我科門診擬診為甲真菌病的病例25例，其中男14例，女11例；年齡16～58歲，平 均34.5歲；病程1個月至8年，平均2.6年。25例的病甲均具有甲板增厚、角質松解、色澤 改變、表面不平等特征。2例無全身性和手足甲病的年輕人作為正常人對照。

（二）取材方法：

1、常規方法刮取甲屑做真菌鏡檢和培養。

2、采用遠端修剪法（3例病甲和正常手、足甲各1例）或全甲拔除術（22例病甲）在消毒后以無菌 器械剪下或拔下甲組織塊，再以無菌剪將其縱行分為兩塊，一半置于10%甲醛溶液中留做病 理檢查，另一半再剪為3mm×3mm大小的三塊放入無菌袋中留做掃描電鏡觀察。

（三）檢查方法：

1、KOH直接鏡檢法：刮取甲屑后按常規方法操作。

2、真菌培養法：甲屑分別接種于含放線菌酮的沙堡培養基和普通沙堡培養基各2～3管，25℃ 孵育20天后鑒定菌種。

3、組織病理學PAS染色法：甲組織塊在10%甲醛溶液中固定24小時，再應用10%硝酸水溶液軟 化1周，石蠟包埋后切6μm厚的切片5至6張，PAS染色后封片光鏡下讀片。

4、掃描電鏡法：每例甲標本一式3份，按內表面、外表面、斷面順序固定于樣品臺上，放入E ikoj IB-Ⅱ型離子濺射儀中噴鍍金膜后，放入日立S-520掃描電鏡進行觀察。此方法診斷 甲真菌病的標準是：在甲斷面上見到真菌菌絲或孢子，或者在甲板內、外表面見到真菌菌絲 向內穿入。

三、結果

（一）KOH直接鏡檢法：25例中20例陽性（80%）。

（二）真菌培養法：25例中18例陽性（72%），其中皮膚癬菌屬8例（紅色毛癬菌7例，絮狀表皮癬 菌1例），念珠菌屬4例，霉菌屬4例（曲霉2例，待鑒定2例），混合感染2例。

（三）組織病理學PAS染色法：25例病甲均見有不同程度的角質增厚、松解和甲板空腔、裂 隙，其中23例（92%）于甲組織內檢出PAS陽性的真菌成分。

（四）掃描電鏡法：25例病甲的內、外表面和斷面均見有不同程度的破壞，表現為甲板 不平、溝、嵴、裂隙、孔洞等，而2例正常甲的各個甲面則平整均一。有24例病甲（96% ）在斷面和（或）內、外表面上檢出真菌成分（附表），從而診斷甲真菌病，僅1例病甲在三個甲 面上均未檢出真菌成分，此例的KOH直接鏡檢、真菌培養和組織病理學檢查均陰性，故提示 很可能不是甲真菌病。2例正常甲的各個甲面均未檢出真菌成分。從檢出真菌的形態來看， 有些是細長分節規則排列的菌絲，有些則是大量聚集的孢子，據此可以大致粗略 區分致病真菌的種類，絲狀真菌還是酵母菌。