不孕不育的免疫學(xué)檢查
免疫不育包括男性抗精子自身免疫不育、女性抗精子同種免疫不育和女性抗透明帶免疫不育。
(一)抗精子免疫不育的檢查
抗精子免疫包括抗精子體液免疫(抗精子抗體)和抗精子細(xì)胞免疫。
(二)抗精子抗體的檢測(cè)
1,性交后試驗(yàn) 于性交后6~24h內(nèi)取宮頸粘液,在高倍鏡下觀察計(jì)數(shù)精子數(shù)。每高倍視野中,有≥21條極度活潑的精子者特異性因素干擾。若血清效價(jià)≥1:32,則可認(rèn)為確含精子抗體。其他尚有毛細(xì)管凝集法及平板凝集法,較少用。
2.補(bǔ)體依賴(lài)性細(xì)胞毒試驗(yàn)及精子制動(dòng)試驗(yàn) 精子抗體與精子抗原結(jié)合,激活補(bǔ)體系統(tǒng),導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性及完整性的損害,若為制動(dòng)抗體,使精干失去活動(dòng)力,制動(dòng)值≥2為陽(yáng)性;若為細(xì)胞毒抗體,則用某些染料染色陽(yáng)性,要求精子活率>70%。微量法僅需樣本幾微升,對(duì)精子活動(dòng)率較低的樣本,可用上游法提取活精子,活率可達(dá)90%以上。奉法僅能檢測(cè)作用于精子尾干的抗體。特異性強(qiáng),敏感性差,假陰性率較高。
3,被動(dòng)血凝法 用精子提取物及精漿包被經(jīng)處理的紅細(xì)胞使之致敏,將致敏紅細(xì)胞與待測(cè)稀釋血清在微量反應(yīng)板上進(jìn)行反應(yīng),出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集為陽(yáng)性。此法不受精子活率、計(jì)數(shù)、精掖中微生物或組織碎片的影響,研究者認(rèn)為此法特異、敏感,但報(bào)道較少,其可靠性及實(shí)用性尚待證實(shí)。
4.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)及生物素-親合素酶聯(lián)免疫吸附法(BA-ELISA) 應(yīng)用完整精干或精子膜抗原包被固相載體,待測(cè)樣本中精子抗體與之培養(yǎng)后可結(jié)合于抗原表面。隨之酶標(biāo)第二抗體亦可結(jié)合其表面,后經(jīng)加酶底物,根據(jù)底物顯色情況判斷結(jié)果。可用肉眼觀察,亦可用酶標(biāo)儀測(cè)定,后者客觀準(zhǔn)確,一般以大于一組陰性血清光密度均值加2倍標(biāo)準(zhǔn)差為陽(yáng)性。由于完整精子包被易致非特異性吸附.因此若以可溶性精子膜抗原包被,則本法敏感、特異、客觀、定量,能確定抗體類(lèi)型,且易操作。BA-ELISA是在常規(guī)ELISA基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新一代定量檢測(cè)法,其敏感性、特異性超過(guò)常規(guī)法。
5.免疫珠試驗(yàn)(1mmunbead Test,IBT) 用抗人免疫球蛋白抗體包被的聚丙烯酰胺微球能結(jié)合于結(jié)合了精子抗體的精子表面,在相差顯微鏡或電子顯微鏡下可見(jiàn)到免疫珠隨精子運(yùn)行,若結(jié)合一個(gè)或多個(gè)免疫珠的精子比例≥lo%為陽(yáng)性。此法可確定抗體的部位、類(lèi)型及結(jié)合精子的比例,能測(cè)出活精子表面結(jié)合的抗體。
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